^
A
A
A

Công trình thử nghiệm về việc cấy ghép các tế bào sừng dị sinh lên vết sẹo nhân tạo của chuột cống trắng

 
, Biên tập viên y tế
Đánh giá lần cuối: 23.04.2024
 
Fact-checked
х

Tất cả nội dung của iLive đều được xem xét về mặt y tế hoặc được kiểm tra thực tế để đảm bảo độ chính xác thực tế nhất có thể.

Chúng tôi có các hướng dẫn tìm nguồn cung ứng nghiêm ngặt và chỉ liên kết đến các trang web truyền thông có uy tín, các tổ chức nghiên cứu học thuật và, bất cứ khi nào có thể, các nghiên cứu đã được xem xét về mặt y tế. Lưu ý rằng các số trong ngoặc đơn ([1], [2], v.v.) là các liên kết có thể nhấp vào các nghiên cứu này.

Nếu bạn cảm thấy rằng bất kỳ nội dung nào của chúng tôi không chính xác, lỗi thời hoặc có thể nghi ngờ, vui lòng chọn nội dung đó và nhấn Ctrl + Enter.

Mong muốn sử dụng tiềm năng của tế bào và nhu cầu tìm kiếm các phương pháp hiệu quả mới để cải thiện sự xuất hiện thẩm mỹ của vết sẹo đã dẫn đến ý tưởng nghiên cứu khả năng cấy ghép keratinocyte lên bề mặt sẹo.

Để chứng minh khả năng của việc sử dụng văn hóa keratinocyte để tăng cường sự xuất hiện của vết sẹo công việc thử nghiệm đã được thực hiện trên chuột trong phòng thí nghiệm trắng, được tạo ra bề mặt vết sẹo. Sẹo chuột mô hình đã được chuẩn bị bằng cách chữa trị vết thương nhân tạo gây ra ở mặt sau, dọc theo cột sống. Chuột bị cắt miếng da đó, kích thước của 2x3 cm. Sau 2,5 tháng sau khi hoạt động "mô phỏng sẹo" chuột được tiến hành phẫu thuật dermabrasion (loại bỏ các lớp trên qua ignioperation dạ cỏ) và keratinocytes allogenic cấy, phân lập từ da của những con chuột trẻ 2-4 ngày sau khi sinh.

Sự cô lập và tăng trưởng của epidermocytes chuột được thực hiện trong phòng thí nghiệm công nghệ tế bào của Viện Khoa học RAS của công nghệ sau đây.

Da đã rửa sạch trong dung dịch nước muối của Hank chứa 200 U / ml gentamicin, cắt thành từng miếng nhỏ, diện tích 0,2-0,5 cm 2. Các khối u da được ủ trong dung dịch disaspase 0,5% trong dung dịch muối phosphate đệm cân bằng ở 37oC trong một giờ. Các miếng này sau đó được chuyển sang nước muối đệm phosphate của Dulbecco và lớp biểu bì được tách ra khỏi lớp hạ bì. Lớp biểu bì được ủ trong dung dịch trypsin 0,125% từ 10-15 phút dưới khuấy với tốc độ 50 vòng / phút, sau đó enzyme đã được ngừng lại bằng cách bổ sung 5% huyết thanh bào thai bò. Một phần ba số kết quả dịch treo tế bào được sử dụng ở dạng tinh khiết với một trong các tùy chọn để cấy sẹo, thứ ba thứ hai trồng trên màng tương hợp sinh học trong nước "Polipor", thứ ba - trên một đĩa petri mà không có một bề mặt. Hoạt động dermabrasion thu được để lại sẹo ở chuột với chuyển nhượng tiếp cho họ epidermotsitov chuột dưới gây mê ether được thực hiện bằng bắng.

Nhóm đầu tiên của chuột sau dermabrasion trên đánh bóng, rửa sạch với nước muối và bề mặt khô dạ cỏ vô trùng chồng miếng cỏ, được lắng đọng scrambled đồng loại chuột epidermotsitov bùn ở nồng độ 1,5 triệu tế bào mỗi 1 ml (theo Viện Tế bào học). Các mảnh Batistovye vừa vặn trên vết sẹo đánh bóng để các tế bào nằm trên bề mặt vết sẹo. Băng trên đầu trang của một vài lớp vải, được khâu vào các cạnh của các vết sẹo.

Một phần của hệ thống huyền phù tế bào đã được mạ trong các đĩa Petri trên các miếng polypore vô trùng được cắt thành hình cốc, phần còn lại trên đĩa Petri không có màng. Việc canh tác được thực hiện trong môi trường FAD bao gồm hỗn hợp DMEM và F12 với tỷ lệ 3: 1. Với việc bổ sung 10% huyết thanh bò, 5 μg / ml insulin (Sigma), 0.5 mg / ml hydisortisone hemisuccinate (Sigma). 10 μg / ml yếu tố tăng trưởng biểu bì EGF (Viện Tế bào học RAS, St. Petersburg). Nhóm thứ hai và thứ ba của chuột có 7 người đã được điều trị 6 ngày sau khi lần đầu tiên. Vào thời điểm này, các tầng lớp đa tầng được hình thành từ sự ngưng của keratinocyt gieo trong các đĩa petri, được cấy vào chuột. Nhóm thứ hai được cấy ghép với epidermocytes trên màng, nhóm thứ ba - với một lớp đa lớp mà không có chất nền. Sau 7 ngày, các lớp nhiều lớp tế bào đa nhân tạo (MPALK), được gieo vào các màng polypore, được cấy ghép trực tiếp lên bề mặt vết thương. Ở trên, bộ phim, để tránh sự rách của nó, đã được cố định bằng băng gạc nhiều lớp và khâu vào da của những con chuột.

Trước khi cấy tế bào sừng nhóm thứ ba của chuột, được trồng mà không bề mặt, tạo ra một tách PAC từ dưới cùng của điều trị món dispase Petri, có khả năng chọn lọc phá vỡ truyền thông Dermo-biểu bì. Dưới tác động của một dispase chứa nhiều lớp phá hủy các kết nối của lớp tế bào đáy xuống đáy đĩa Petri và đến một mức độ thấp hơn nhiều, nó ảnh hưởng đến giao tiếp intercellular, mà làm cho nó có thể "loại bỏ" toàn bộ lớp. Sự tách rời của tầng lớp đa tầng bằng cách bố trí được thực hiện như sau. Từ các món ăn Petri pha trộn phương tiện vận tải, các tấm tế bào được rửa ba lần với môi trường có chứa kháng sinh, đặc biệt - gentamicin (0,2 mg / ml). Lớp Multilayer được rót 0.125 giải pháp% dispase ( «Sigma») và được đặt trong một lồng ấp nơi họ được ủ tại t = 37 ° C trong vòng 20-30 phút. Sự xuất hiện của corolla màu trắng, bong tróc quanh ngoại vi của hồ chứa - một chỉ số về sự khởi đầu của quá trình tách nó ra khỏi các cạnh và đáy của đĩa Petri. Một vài phút sau khi bắt đầu quá trình tách, giải pháp dispase được làm trống 2-3 lần lớp biểu mô được rửa với trung bình. Trên bề mặt của lớp biểu bì đã được áp dụng, cắt theo kích cỡ tách mảnh vết thương vô trùng ăn mặc "Leith màu, được chẻ tách dispase hình thành, phân lớp hơn nữa đáy cốc bằng thìa. Sử dụng nhíp mắt lớp cùng với lớp phủ của khăn ăn" Leith màu "(Nga ) tách ra từ đáy của một đĩa petri và cẩn thận chuyển lên bề mặt chuẩn bị của các vết sẹo. Khăn giấy "Lita màu" chứa trong thành phần của nó và eksolin gentamicin (collagen chiết xuất), mà khi ướt môi trường vẫn nảy mầm trong tương lai dung dịch muối Shem tăng lên và trở thành lớp phủ vết thương hiện đại, cung cấp sự bảo vệ tốt khỏi bị nhiễm trùng bên ngoài và làm lành nhanh chóng do ẩm ướt phôi thai với cấu trúc.

Các màng polyprop và khăn ăn Lita được phủ lớp băng gạc đã được khâu vào da của chuột để giữ vững chắc hơn. Mỗi con chuột được đặt trong một cái lồng riêng biệt để tạo điều kiện tối ưu cho việc duy trì và ghép các keratinocyt được cấy ghép. Băng chuột mà cấy treo và nhiều lớp chứa epidermotsitov bắn dispase, mỗi ngày nhiều lần trong ngày, làm ẩm bằng nước muối vô trùng để tạo ra các điều kiện thuận lợi nhất các tế bào cho cấy ghép. Xét rằng bộ phim "Polypor" không thấm nước, những con chuột của nhóm thứ hai không làm ẩm vết thương, đó là một trong những ưu điểm của việc cấy ghép mà không có màng. Sau 10 ngày, băng đã được gỡ bỏ. Hình ảnh lâm sàng của những vết sẹo sau khi cấy ghép tế bào rất khác biệt so với những vết sẹo mà không có sự cấy ghép, ngoại trừ màu hồng nhiều hơn (do da bị vỡ mỡ) và lột da nhiều hơn. Thực tế này cho thấy điều đó. Ngay sau khi lớp phủ vết thương bị mất đi với IPC, không có thay đổi nào xảy ra trong dạ cỏ.

Lấy vật liệu sinh thiết ở chuột.

Sau 1, 2, 5 và 9 tháng sau khi truyền keratinocyt chuột alogic đến các vết sẹo trên nền của chuột trắng, vật liệu được lấy để kiểm tra bằng mô học, tế bào học và tế vi học. Như một mẫu kiểm soát của da chuột bình thường và sẹo đã được thực hiện mà không cần ghép tế bào. Gây mê ở chuột được thực hiện bằng gây tê ether.

Sau khi gây tê, từ các khu vực được đánh dấu, vào keratinocytes đã được cấy ghép, một viên tạo viên sinh thiết có đường kính 2 mm. Các mảnh mô sẹo được lấy và đặt trong dung dịch glutaraldehyde 2.5% để chuẩn bị vật liệu cho kính hiển vi điện tử. Mẩu mô lấy để kiểm tra mô học được đặt trong 10% dung dịch formalin trung lập, tiếp theo là thông qua hệ thống dây điện rượu và điền vào parafin, sau đó bằng cách cắt các bộ phận siêu mỏng và xem chúng trong kính hiển vi ánh sáng quang học.

Kiểm soát I. Da chuột bình thường.

Để thấy sự khác biệt giữa hình ảnh vi mô của da da bị sẹo thay đổi ở chuột và vết sẹo ở những thời điểm nhất định sau khi cấy IPC, các bức ảnh và các mô tả cho họ ở tất cả các giai đoạn của nghiên cứu này đã được chứng minh.

Các lớp biểu bì của da bình thường bao gồm 7-9 lớp tế bào. Horny lớp dày vừa phải. Ở những nơi nó bao gồm 6-8 lớp vảy sừng. Lớp bazan được thể hiện bằng các tế bào hình trụ có các hạt nhân ánh sáng lớn, thường xuyên và một vài hạt nhân. Sự biểu hiện rõ ràng giữa các tế bào và màng nền được thể hiện rõ ràng. Dưới cũng xác định màng cơ bản trong đó có protuberances tốt trong lớp subepidermal nằm song song với các bó nhẹ nhàng của sợi collagen và elastin, bao gồm các nguyên bào sợi dài, tàu nhỏ. Ở các lớp sâu hơn, các bó sợi collagen và elastin nằm ở các hướng khác nhau. Trong số đó có nhiều tàu có các bức tường mỏng cùng cỡ nòng, các yếu tố di động (nguyên bào sợi, tế bào bánh, bạch bào). Trong một số lượng lớn nang lông, tuyến bã nhờn.

Kiểm soát 2. Sẹo của chuột 2 tháng tuổi.

Hình ảnh lâm sàng. Các vết sẹo màu hồng nhạt, với vết bẩn, ở những nơi lớp vỏ vẫn còn. Khu vực của họ bị giảm đi do sự co lại của các sợi collagen và trở thành khoảng 3,0-3,5 cm :. Tệp đính kèm da vắng mặt.

Hình ảnh vi mô. Lớp biểu bì gồm 3-5 lớp tế bào, xếp ly, đại diện bởi các tế bào cơ bản tròn, giống hình cây giùi một hàng, 1-2 hàng keratohyalin hạt với hạt trong lớp trên, có phần phù nội bào. Lớp giác mạc được thay đổi không đồng nhất từ rất mỏng đến dày. Có một sự gấp nếp của dạ cỏ do (co lại) của mô sẹo. Các nếp gấp xâm nhập vào lớp nhú và gây ấn tượng về nhú. Ranh giới giữa lớp biểu bì và lớp hạ bì là một đường thẳng. Màng cơ sở không thể dò được ở mọi nơi. Ở phần dưới của lớp dưới và dưới sâu - các mạch máu với một bức tường dày, nới lỏng, nhiều người bị bỏ hoang, với hiện tượng ứ đọng. Xung quanh mạch - một cụm các đại thực bào, nguyên bào sợi. Các macrophage bao quanh hồng cầu xuất hiện từ mao mạch và phagocytize chúng. Ở các lớp bề mặt nhiều hơn - các mao mạch nhỏ. Dưới lớp biểu bì, các sợi collagen bị mất. Trong lớp sâu hơn của dải rumen - các sợi collagen, trong đó có nhiều nguyên bào sợi.

Sẹo mổ của chuột một tháng sau khi cấy ghép chuột túi chuột bạch chuột.

Hình ảnh lâm sàng. Bố cục màu hồng, diện tích của chúng giảm, đặc biệt đường kính và trung bình 2,5-3 cm 2. Tóc và tuyến bã không có.

Những xét nghiệm vi của vật liệu lấy từ chuột với chuyển MPAlK MPAlK trên phim và các bề mặt mà không giống hệt nhau đáng kể. Tuy nhiên, về mặt kỹ thuật, làm việc với MPAlK không được hỗ trợ nhiều hơn nữa khó khăn và mất thời gian hơn khi trưởng thành MPAlK trên bề mặt, vì vậy các nghiên cứu sâu hơn về vấn đề này trên ghép kertainotsitov sẹo chúng tôi sử dụng làm cơ sở cho việc trồng ( "bề mặt") cỏ lớp.

Hình ảnh vi mô. Có lớp biểu bì dày lên đến 15-20 lớp, gần như ở giữa của lớp keratinocytes có hình dáng hẹp, dài, thẳng đứng và một sự sắp xếp nhỏ gọn. Các tế bào đáy được sắp xếp theo một đường không đều. Hạt nhân của chúng có khối lượng nhỏ, tròn, tròn với một hoặc hai hạt nhân, cho thấy hoạt tính tổng hợp và sinh sôi nảy nở cao. Ranh giới giữa lớp biểu bì và lớp hạ bì là một đường thẳng. Lớp gai được phát triển tốt, bao gồm 3-5 lớp tế bào hình tròn, có 2 tế bào nhân.

Ngay dưới màng bazan - những bó sợi collagen mỏng, song song với chúng một số lượng lớn các sản phẩm có sản phẩm nào, các sợi collagen sâu hơn rất thô, thu được trong các bó dày đặc. Nhiều nguyên bào sợi lớn, tế bào mast (2-3 trong lĩnh vực thị giác), đại thực bào, bạch cầu và các mạch rỗng, các bức tường được nới lỏng, xung quanh chúng là các sợi collagen lỏng lẻo. Trong một số mạch - ứ đọng, diapedesis của các yếu tố thống nhất. Xung quanh mạch - nguyên bào sợi, bạch huyết bào đơn. Tệp đính kèm da vắng mặt.

Khi một huyền phù keratinocyte được cấy ghép vào một vết sẹo đánh bóng, hình ảnh vi mô khác với hình ảnh trước đó. Ở hầu hết động vật - lớp biểu bì mỏng, bao gồm 5-6 lớp tế bào. Lớp dưới bao gồm các tế bào có hình dạng bất thường, đa giác với các hạt hình tròn có hình dạng không đều. Tình trạng của lớp dưới da tương tự như trong nhóm động vật mà không cần cấy ghép.

Trong trường hợp này, người ta có thể nói sự chậm trễ của các quá trình đi kèm với sự cấy ghép tế bào, hoặc sự mất mát lớn của tế bào được cấy ghép dưới hình thức một hệ thống treo. Do đó, một kết luận đã được thực hiện rằng việc sửa chữa sẹo bằng cách cấy ghép keratinocyte dưới hình thức đình chỉ là không phù hợp.

Sẹo mổ của chuột 2 tháng sau khi cấy ghép chuột túi chuột bạch chuột.

Hình ảnh lâm sàng. Sẹo trông mỏng, mềm. Ở những nơi có phân tâm, cân.

Hình ảnh vi mô. Các lớp sưng corneum được làm dày, ở những nơi - hyperkeratosis. Các lớp biểu bì dày lên, nó bao gồm 12-20 hàng của các tế bào. Ranh giới giữa lớp biểu bì và lớp hạ bì là một đường thẳng. Các sợi collagen tinh thể dưới da biểu hiện khá chặt chẽ. Ở những lớp sâu hơn của dạ cỏ, chúng được thu thập trong những bó lớn thô. Trong lớp subepidermal, một sự hình thành các mạch máu mới xuất hiện. Ở các lớp dưới của mô sẹo - nhiều bình rỗng, nằm song song với bề mặt của biểu bì. Các nguyên bào sợi lớn được phân bố đều trong độ dầy của dạ cỏ, có những đại thực bào khổng lồ, nhiều mặt, nhiều đại thực bào.

Sẹo mổ của chuột 5 tháng sau khi cấy ghép MP của bào tử chuột.

Hình ảnh lâm sàng. Vết sẹo trông mịn màng, mượt mà, không bong tróc, có tóc duy nhất của mật độ lớn hơn của họ trên vùng ngoại vi của vết sẹo, mà chỉ ra rìa nang lông mọc ngược trong dạ cỏ và khối u của các nang tóc. Vùng vết sẹo tiếp tục giảm.

Hình ảnh vi mô. Các lớp biểu bì vẫn còn dày (15-20 lớp, đôi khi lên đến 30) ở các lớp trên là đầy hạt keratogialin. Màng nền có thể nhìn thấy rõ ràng. Dưới sợi collagen cô bị lỏng. Ở tầng dưới - collagen mạnh hơn và chặt chẽ hơn. Trong số các chùm collagen có nhiều mao mạch. Ở các lớp trên số lượng các mạch rỗng giảm. Lớp biểu bì và lớp hạ bì hơi lượn sóng. Có những tế bào biểu bì sâu trong các mô sẹo. Trong số các sợi collagen có thể nhìn thấy được tàu mới được hình thành. Xuất hiện các nang lông đơn và tuyến bã nhờn.

Sẹo mổ của chuột 9 tháng sau khi cấy ghép epidermocytes chuột bạch chuột của IPA.

Hình ảnh lâm sàng. Vết sẹo nhỏ hơn nhiều so với giai đoạn trước đó, và trung bình khu vực của họ về 1,5-2,0 cm 2. Vết sẹo được phủ một cách không đều bằng lông mỏng, đặc biệt là quanh vùng ngoại vi. Việc thu nhỏ miếng nhỏ được giữ lại.

Hình ảnh vi mô.

Các lớp biểu bì trở nên mỏng hơn, đại diện từ 6-8 hàng của các tế bào, gợi nhớ về cấu trúc của da trên da bình thường của chuột, chỉ có mật độ tế bào ở 1 mm. Cao hơn và chúng nhỏ hơn. Lớp cơ bản bao gồm các tế bào nhỏ hình tròn. Màng cơ sở được xác định rõ, các hemidsmosome được nhìn thấy rõ ràng. Sự hiện diện của sự phát triển của lớp biểu bì ở lớp dưới da. Lớp nhú được biểu hiện dọc theo chiều dài của vết sẹo. Những sự kiện này chỉ ra rằng trong thời kỳ này sự kết dính của keratinocytes được cấy ghép đã trở nên mạnh hơn đáng kể với các mô nằm bên dưới của dạ cỏ. Do đó, chăm sóc vết sẹo của những người bị ghép MALC 9 tháng sau khi cấy IPC có thể là truyền thống. Dưới lớp biểu bì là các sợi collagen tinh tế hơn ở các lớp sâu. Có rất nhiều tàu thuyền, đặc biệt là nằm trên bề mặt. Trong các tàu lớn hơn, các bức tường được dày lên. Rụng tóc và tuyến bã nhờn với số lượng lớn. Mô hình vi mô giống với mô da.

Kết quả của công việc thực nghiệm và thảo luận của họ.

Trong công việc này trên vết sẹo nhân tạo da của chuột sau dermabrasion hoạt động, keratinocytes cấy trong nhiều formah- trên bề mặt vết thương, như một hệ thống treo trong lanh và sự hình thành lớp mà không có một bề mặt. Nghiên cứu được thực hiện để có được dữ liệu hình thái về ảnh hưởng của keratinocyt tái tạo trên các vết sẹo, cũng như xác định các biến thể cấy ghép tối ưu.

Phát hiện ra rằng cả ba phương pháp cấy ghép đều là có thật, nhưng việc cấy ghép IPAA không có chất nền là một thủ thuật rất tốn kém, trong đó IPAC có thể bị thương, ảnh hưởng đến kết quả cấy ghép. Hơn nữa, phương pháp cấy ghép này không bao gồm các công việc trên bề mặt lớn.

Ghép treo keratinocyte - là đáng kể phương pháp kinh tế hơn không đòi hỏi một tế bào dài nuôi và đơn giản trong sự hiện diện, tiếp xúc bằng khuôn phôi lanh vô trùng, kích thước của tương ứng với giá trị của sẹo. Độ trễ của hiệu quả điều trị trong quá trình ghép tế bào đình chỉ khoảng một tháng so với MIC trên lớp phủ vết thương không phải là một thời điểm đáng kể với thời gian điều trị được tính trong nhiều tháng. Được biết rằng trong quá trình cấy IPC để đốt bệnh nhân, sự chuyển đổi trạng thái cấu trúc da xảy ra dần dần và trong nhiều năm. Cấy ghép văn hoá keratinocyte trên lớp phủ vết thương là phương pháp thuận lợi và hứa hẹn nhất, tuy nhiên, nó cũng đắt hơn nhiều. Ngoài ra, đòi hỏi ngày hôm nay việc tìm kiếm các lớp phủ tinh vi hơn phải được nhựa, hút ẩm, có tính chất vi khuẩn hoặc diệt khuẩn và trung tính về mặt sinh học đối với tế bào. Bộ phim "Polipor" - một phiên bản trung gian của vùng phủ sóng phim vết thương trong nước, mặc dù một số thiếu sót, đã cho phép chúng tôi nghiên cứu chuột cấy ghép thực nghiệm keratinocyte trên vết sẹo và để rút ra kết luận về tính hiệu quả của việc này sẹo hấp dẫn hướng.

Các tác giả thực hiện việc cấy ghép IPC trên vết thương bị bỏng ghi nhận rằng trong tuần đầu tiên sau khi cấy ghép lớp lớp keratinocyte nhiều lớp trên vết thương đã được làm vệ sinh, lớp biểu bì dày lên và phân tầng. Tất cả các lớp biểu bì được xác định rõ ràng. Điều thú vị là số lượng các lớp tế bào trong các ca cấy ghép là 10-30% lớn hơn trong mẫu sinh thiết da. Các tác giả ghi nhận sự xuất hiện của hạt keratogialin vào ngày thứ 5 sau khi cấy ghép MPA, màng nền và hemidesmosomes - đã vào ngày thứ ba.

J.Rives và cộng sự (L994), Paramonov BA (1996); NM Kuznetsov et al. (1998) phát hiện ra rằng trong suốt các giai đoạn sớm sau ghép bệnh nhân bị dị tật da polnosloynymi BMD sau bỏng, thông tin liên lạc giữa các lớp hạ bì và biểu bì là rất yếu và là một đường thẳng, lớp nhú vắng mặt. Tính đến hết tháng thứ 2 bắt đầu sự hình thành của nhú cạn và phần phụ da, lớp hạ bì thông tin liên lạc và lớp biểu bì trở nên mạnh hơn. Văn học dữ liệu ghép govoryato keratinocytes đồng loại cho vết thương đốt bệnh nhân như một phương pháp đầy hứa hẹn. Mặc dù thực tế rằng sự từ chối của keratinocytes đồng loại xảy ra do tác giả khác nhau trong khoảng thời gian từ 10 ngày đến 3 tháng, tuy nhiên, họ có một vai trò trong việc chữa lành của bề mặt vết thương, giải phóng yếu tố tăng trưởng và cơ học đóng khiếm khuyết. Người ta tin rằng MPAlK đã làm giảm hoạt động kháng nguyên, như khi nuôi cấy in vitro mất các tế bào Langerhans cho phép chúng tồn tại trong một thời gian dài trong cơ thể của người nhận. Bên cạnh đó, văn hóa đồng loại có nguồn gốc từ da của những người trẻ khỏe mạnh có tiềm năng sinh học cao hơn nhiều so với văn hóa tự thân của bệnh nhân sau chấn thương.

Mục tiêu chính của nghiên cứu này là tìm hiểu xem các tế bào keratinocyt có khả năng sinh sản sẽ tồn tại trên vết sẹo và những thay đổi trong mô sẹo dưới ảnh hưởng của việc "vết thương" hoạt hóa sinh học như thế nào. Trong trường hợp có kết quả tích cực, hãy tìm ra công nghệ hiệu quả nhất và ít tốn công lao động nhất trong lĩnh vực y học phục hồi chức năng.

Các dữ liệu thu thập được bởi chúng tôi ở nhiều khía cạnh hóa ra là tương tự như các dữ liệu về biến đổi hình thái xảy ra trong lớp biểu hiện của con người sau khi chuyển keratinocyt allogenic để đốt vết thương. Nhưng có sự khác biệt đáng kể, cả về mặt chất hình thái, được cấy ghép, và về công nghệ. Vì vậy quá trình hình thành màng nền và kết nối da dermo-epidermal (hemidesmosomes, papillae) xảy ra vào một ngày sau đó hơn trong việc cấy ghép tế bào keratinocyte lên bề mặt vết thương mà không có sự thay đổi sẹo. Điều này dường như là do chế độ dinh dưỡng kém của mô dạ cỏ so với lớp hạ bì hoặc mô cơ. Sẹo, đặc biệt là mô sẹo cũ, là một mô liên kết dày đặc với một số lượng rất nhỏ các mạch máu, đáy của vết bỏng là một mô hạt có nhiều mạch máu. Do đó, rõ ràng là các điều kiện mà việc cấy ghép và ghép tế bào da có sự khác biệt hoàn toàn. Các vascularized khu vực của việc cấy ghép các tế bào, dễ dàng hơn là để xử lý chúng. Từ giả định này, có một kết luận về sự ưu tiên để làm việc với những vết sẹo trẻ, trong đó mô liên kết vẫn còn lỏng lẻo và có nhiều mạch máu.

Như một kết quả của công việc thử nghiệm này, nó đã chứng minh rằng:

  1. Có thể cấy ghép MALK vào vết sẹo. 
  2. Phương pháp ghép tối ưu là cấy ghép keratinocytes trên lớp phủ vết thương.
  3. Bề mặt của vết sẹo nên được làm bằng đất sử dụng một phẫu thuật dermabrasion sử dụng Schumann của laser hoặc một máy cắt.
  4. Dưới ảnh hưởng của MPALK, biểu hiện nhanh của bề mặt đất dạ cỏ xảy ra.
  5. Mô sẹo có mạch máu tốt hơn, nghĩa là sẹo trẻ hơn, thì kết quả của việc cấy ghép keratinocyte càng tốt.
  6. Các mô sẹo dưới ảnh hưởng của keratinocyt được cấy ghép đang dần dần biến đổi và biến thành một dạng da (mô sẹo dễ vỡ hơn với các phần phụ của da).
  7. Sự nới lỏng dần dần của mô sẹo bắt đầu bằng lớp thượng bì. Cải thiện sự vascularization của nó, các bó sợi collagen ở phần trên và dưới của dạ cỏ có vị trí dễ chảy hơn so với mô sẹo mà không cần ghép tế bào. Có nang lông và tuyến bã nhờn. Đuôi trong cấu trúc của nó, sau khi đi qua giai đoạn phì đại, đang tiếp cận lớp biểu bì của da bình thường.
  8. Những thay đổi quan sát có liên quan đến keratinocytes tiết ra yếu tố tăng trưởng, các cytokine rằng việc cải thiện trophism mô sẹo góp phần chuyển đổi từ một mô xơ cứng trong một lỏng hơn, dẫn đến một sự cải tiến của sẹo.

Do đó, dựa trên nghiên cứu này, có thể kết luận rằng tác động có lợi của keratinocyt được cấy ghép lên mô sẹo, có thể có ý nghĩa thực tiễn cho việc phục hồi bệnh nhân với các loại sẹo khác nhau.

Công việc này trên chuột cũng được phép xây dựng yêu cầu. Để lớp phủ vết thương, trên đó keratinocytes được trồng.

Vết thương bao gồm:

  • biocompatible với tế bào,
  • thở,
  • có một cơ sở đàn hồi, xây dựng hình thức,
  • được hydrophilic,
  • vì các chất phụ gia chứa thuốc có chứa các chất kháng khuẩn và các chất chống oxy hoá không độc hại cho các tế bào nuôi cấy.

Kết quả lâm sàng về điều trị sẹo bằng công nghệ sinh học.

Trước đó, N. Carver et al. (1993) phát hiện ra rằng vết bít kín là tốt nhất để gắn vào vết thương và sự sống còn của keratinocytes, nhưng không cho phép hình thành một lớp biểu bì phân tầng (trưởng thành). Để tạo thành lớp biểu bì, một môi trường không khí là cần thiết. Do đó, sau khi gắn lớp nhiều lớp, một lớp phủ vết thương khiếm khuyết đã được gợi ý sau 7-10 để loại bỏ và dẫn vết thương dưới băng khô hoặc thuốc mỡ tan trong nước. Chúng ta có thể nói rằng chất lượng và tính chất của "chất nền" mà tế bào phát triển là rất quan trọng đối với hiệu quả của việc cấy ghép các vật liệu tế bào, và kết quả là do kết quả của công việc của các bác sĩ. Nhưng ngày hôm nay không có lớp phủ vết thương lý tưởng, mặc dù có nhiều lựa chọn được đề xuất (da nhân tạo, vải không dệt của carboxymethylcellulose, lớp phủ fibrin, màng polyurethane bán nhanh). Không phải là thời điểm không quan trọng trong vấn đề này là chi phí "chất nền" (vết thương đặc biệt), vì chi phí cao của chúng làm tăng tổng chi phí điều trị công nghệ sinh học.

Hiệu quả của công nghệ di động đã được chứng minh là đúng, nhưng tiếc là những công nghệ này rất đắt đỏ, đặc biệt là ở những nước không thành lập các sản phẩm cellular. Tuy nhiên, các nước như Hoa Kỳ từ lâu đã thiết lập một ngành công nghiệp để sản xuất vật liệu di động để cấy ghép đốt. Đặc biệt, công ty BioSurface Technology Inc, từ năm 1989, tăng 37.000 lớp ép các tế bào sừng, đã được sử dụng để điều trị 240 bệnh nhân ở 79 quốc gia trên toàn thế giới (R.Odessey, 1992) với 1 cm 2 nuôi cấy tế bào chi phí khoảng 7-8 $ US.

Công nghệ điều trị các bệnh khác nhau và các vấn đề về da có một số khác biệt, nhưng ở trung tâm của bất kỳ điều trị với các tế bào là sản xuất chất lượng tế bào vật liệu và cấy ghép của nó.

Quá trình này bao gồm các bước sau:

  • lựa chọn da từ những người bị ảnh hưởng (hoặc từ các nhà tài trợ),
  • vận chuyển nắp da đến trung tâm công nghệ sinh học,
  • sự cô lập của các tế bào của lớp cơ sở và sự nhân lên của chúng,
  • xây dựng lớp lớp keratinocytes đa tầng (IPC).
  • ghép tế bào nuôi cấy.

Vấn đề chính trong điều trị với việc cấy ghép tầng lớp keratinocyte nhiều lớp là sự cần thiết cho các tế bào khả thi ở tất cả các giai đoạn của việc cấy ghép tế bào. Các mảnh da để tách các tế bào autologous hoặc allogeneic nên càng mỏng càng tốt, vì trong trường hợp này chúng dễ dàng tách ra bằng các phương pháp cơ học và enzyme và để có được sự đình chỉ các tế bào sống để tăng trưởng. Chúng có thể được lấy bằng cách cắt bỏ lớp da hoặc sử dụng da của mí mắt, da bọc qui đầu, bề mặt bên trong của vai. Do các tế bào nhạy cảm với halogen (clo, iodine), hydrogen peroxide, chúng không thể được sử dụng trong điều trị da tại thời điểm lấy chất liệu.

Năng suất định lượng và định tính của các tế bào từ ghép da và hiệu quả của việc trồng chúng cũng phụ thuộc vào tình trạng sức khoẻ và tuổi của người hiến. Ngoài ra, mẫu sinh thiết da phải được cung cấp cho phòng thí nghiệm càng sớm càng tốt và trong điều kiện thích hợp (môi trường, nhiệt độ) chuyển đến phòng thí nghiệm được chứng nhận và được công nhận.

Eagle của trung bình hoặc trung bình 199 với việc bổ sung 10% bò huyết thanh, môi trường DMEM bổ sung 5% huyết thanh bò và kháng sinh có thể được sử dụng để lưu trữ và vận chuyển da flaps.

Trong phòng thí nghiệm tế bào học, sinh thiết da lần đầu tiên được chia thành các phần nhỏ, sau đó việc xử lý các mảnh da được thực hiện với sự trợ giúp của enzyme trypsin, collagenase, dyspase, vv

Dưới sự hoạt động của enzyme, sự hủy hoại của desmosomes diễn ra và keratinocytes được giải phóng ra môi trường như các tế bào hoặc cốt liệu riêng biệt bao gồm các số lượng tế bào khác nhau. Đối với nuôi cấy, chỉ sử dụng keratinocyt cơ bản được nuôi cấy trên phương tiện đặc biệt trong lồng ấp có chứa 5% CO, trong các đĩa petri hoặc trong lọ ở t = 37 ° C. Trong vòng 48 giờ, sự hình thành các khuẩn lạc keratinocyte được quan sát thấy, dần dần hội tụ thành một lớp đơn. Sau khi thu được một số lượng đủ các tế bào, hệ thống treo kết quả được lan truyền trên lớp phủ vết thương được chuẩn bị cho mục đích này và đặt vào các đĩa Petri. Từ sự đình chỉ, đầu tiên là một lớp đơn và sau đó một lớp nhiều lớp tế bào nhân tạo được tạo thành. Theo sơ đồ, các giai đoạn của quá trình canh tác keratinocyte được thể hiện trong hình. 12 (33.43.54.65).

Sự hình thành sự hình thành keratinocyte đa lớp thích hợp cho việc cấy ghép thường mất 7-10 ngày. Đôi khi khoảng thời gian này dài hơn, phụ thuộc vào chất lượng của nguồn nguyên liệu (tuổi, sức khoẻ của người hiến tặng, tính đúng đắn của chất liệu, chất lượng của phương tiện được sử dụng, v.v ...). Nếu lớp nhiều lớp phủ lên, sau đó trên bề mặt của nó có thể có tế bào với hiện tượng apoptosis không thích hợp cho việc cấy ghép. Các đĩa Petri, đã được trồng ở trên lớp phủ vết thương bởi các lớp keratinocytes đa tầng (IPC), được đưa đến phòng khám trong các bình chứa đặc biệt ở nhiệt độ không thấp hơn + 15 ° C

Phương pháp cải tiến của Green để phát triển IPC

Trong công việc của chúng tôi như là một lớp phủ vết thương, chúng tôi đã sử dụng một lớp phủ nhiều lớp, từ bỏ các bộ phim polypore mà chúng tôi bắt đầu làm việc trong một cuộc thí nghiệm với chuột. Do đó, tầng lớp keratinocyte nhiều lớp được trồng bởi chúng tôi trên lát gạch vô trùng và vô trùng, mặc dù nó cũng không phải là lớp phủ vết thương tối ưu.

Các nghiên cứu lâm sàng được tiến hành trên những người tình nguyện với việc tuân thủ các quy tắc đạo đức cần thiết: ký một hiệp ước và sự đồng ý có thông tin.

  1. Văn hoá của riêng (autologous) và lấy từ keratinocytes tế bào ngân hàng (allogenic).
  2. Các tế bào keratinocytes được lấy từ một miếng da cắt từ bên trong vai của bệnh nhân.
  3. Hoạt động của vết thẹo bằng sẹo được thực hiện với sự trợ giúp của các cặp nhiệt, đĩa quay và laser erbium.
  4. Các nhóm bệnh nhân có vết sẹo bình thường, thiếu máu và hypertrophic đã được chụp.

Quy trình công nghệ để ứng dụng công nghệ di động để cải thiện loại sẹo da bao gồm các giai đoạn sau:

  1. Lựa chọn bệnh nhân.
  2. Giải thích bản chất của việc điều trị, thời gian đạt được kết quả mong đợi, ký kết một hiệp ước và sự đồng ý có thông tin.
  3. Bổ nhiệm các bệnh nhân trong 2-3 tuần trước khi phẫu thuật sỏi bằng 1t. 3 lần một ngày, zinkteral trên 1t. 3 lần một ngày.
  4. Lấy một miếng da dài 2,0 cm và rộng 0,7-1,0 cm từ bề mặt bên trong của vai, cao, gần như ở dưới cùng của vùng nách, để lấy các tế bào keratinocyt tự autologous.
  5. Trong trường hợp bệnh nhân từ chối tách bạch keratinocytes của họ vì khả năng có một vết sẹo tuyến tính trên bề mặt bên trong của vai, vật liệu tế bào được lấy từ một tế bào của tế bào (các tế bào keratinocyt allogenic).
  6. Keratinocytes đã được phân lập và trồng trong điều kiện của một phòng thí nghiệm được chứng nhận cho loại công việc này.
  7. Sau khi nhận được IPC đủ để cấy ghép, một ngày phẫu thuật đã được thực hiện để các vết sẹo tại phòng khám, nơi mà vật chất đã được đưa vào các thùng chứa đặc biệt trong các đĩa Petri.
  8. Các hoạt động của dermabrasion của dạ cỏ, haemostasis đã được thực hiện, mặt đất đã được rửa sạch với dung dịch muối vô trùng, làm khô, sau đó IPC được cấy ghép trên batiste vô trùng "tế bào xuống". Nghĩa là, các tế bào ở trên MIC thấp hơn, gần với bề mặt đánh bóng.
  9. Một bộ phim vô trùng được xếp chồng lên trên, được gắn vào da với băng keo đàn hồi hoặc băng keo đàn hồi Omnifix. Thay vì phim, có thể sử dụng các lớp phủ vết thương chứa silicone, ví dụ Mepitel, Mepiform, silicone gel.

Sau 5-7 ngày, lớp màng hoặc silicone được loại bỏ. Bởi thời gian này, tất cả các keratinocytes phải thu thập dữ liệu vào vết sẹo đánh bóng và gắn với bề mặt của nó.

  1. Môi trường ẩm ướt được tạo ra dưới lớp màng và lớp phủ silicone đang tích cực đóng góp cho việc này. Người báp têm còn lại trên vết sẹo từ thời điểm này có thể được ngâm tẩm bằng curiose hoặc chitosan gel. Kết quả là, vào ngày thứ 2, lớp vỏ dày đặc được tạo ra, để thuận tiện cho bệnh nhân, tốt hơn là nên cố định bằng thạch cao thun, thấm không khí, ví dụ như Omnifix. Lớp vỏ dễ thở cho phép lớp biểu hiện mới hình thành để phân biệt và biến thành một lớp trưởng thành.

Tùy thuộc vào loại vết sẹo và độ sâu của mài, băng băng bị loại bỏ sau 8-10 ngày. Lớp biểu bì ở thời điểm này có 30-40% lớp tế bào hơn da bình thường. Màng cơ sở không được hình thành. Keratinocytes của lớp biểu bì dày đặc giải phóng một lượng các phân tử hoạt tính sinh học vào mô sẹo.

Sự thành công của việc điều trị sẹo bằng công nghệ sinh học phần lớn phụ thuộc vào cách họ được chăm sóc trong giai đoạn hậu phẫu. Nuôi cấy tế bào là một loại bao phủ vết thương và trong giai đoạn đầu sau khi cấy, BMD có thể dễ dàng bị tách khỏi các mô bên dưới. Vì vậy, bệnh nhân được khuyên để chăm sóc vết sẹo sau khi phẫu thuật. Đối với 8-9 tháng, không chà xát và dễ dàng làm việc với nước đun sôi lạnh để tránh làm xước một lớp biểu bì mỏng mới được tạo ra mà không có kẹp chặt chẽ với mô dưới.

Lưu ý:

Trước khi phẫu thuật và quá trình sử dụng dermabrasion của oxy hóa halogen và chất bảo quản (yodopiron, sulyodopiron, iodinol, yodinat, chlorhexidine, hydrogen peroxide) được phép trước khi cấy kletok- hoàn toàn chống chỉ định do tác động gây độc tế bào của họ. Độc với tế bào cũng là màu xanh methylene. Màu xanh rực rỡ.

Để tránh nhiễm trùng, đặc biệt là khi làm việc với sẹo phì đại, có thể điều trị các lĩnh vực hoạt động với neomycin sulfat, polymyxin hoặc gentamicin. Chúng không gây ra tác dụng gây độc tế bào đối với keratinocytes.

Kết quả của việc điều trị này, đạt hiệu quả ba lần.

  1. Sắp xếp bề mặt của dạ cỏ.
  2. Tạo một lớp trên nó của một lớp biểu bì mới, độ dày bình thường.
  3. Sự chuyển đổi mô sẹo thành mô da như do cytokine hoạt động, các yếu tố tăng trưởng và các phân tử hoạt tính sinh học khác, được tiết ra bởi các tế bào được cấy ghép và kích thích bởi các tế bào keratinocytes, nguyên bào sợi và đại thực bào.

Sẹo trở nên ít chú ý hơn, đàn hồi hơn, lỗ chân lông xuất hiện trong đó, tóc cạo, màu sắc có thể được phục hồi do sự có mặt của tế bào bạch cầu trong MPC.

Tuy nhiên, tất cả những khoảnh khắc tích cực trong cicatrix không đến ngay lập tức. Về vấn đề này, nó là cần thiết để cảnh báo bệnh nhân. Rằng quá trình chuyển đổi các mô sẹo vào lớp hạ bì là chậm và kết quả tối ưu của điều trị như vậy có thể được mong đợi không sớm hơn 10-14 tháng. Ngay sau khi mặc quần áo bị từ chối, các bề mặt đánh bóng có một polychrome phát âm, sáng hơn quá trình mài là. Ít nhất là thiệt hại cho da xảy ra khi mài các vết sẹo normotrophic với một erbium laser. Màu của các vết sẹo và vùng da xung quanh được khôi phục trong khoảng từ 3 đến 8 tuần. Mặc dù các biện pháp phòng ngừa như vậy, đôi khi có tăng sắc tố sau phẫu thuật, có thể tiếp tục độc lập trong nhiều tháng.

trusted-source[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]

You are reporting a typo in the following text:
Simply click the "Send typo report" button to complete the report. You can also include a comment.