Phân tích đa hình độ dài đoạn giới hạn

Việc sử dụng rộng rãi các endonucleases hạn chế khác nhau để phân tích DNA nhiễm sắc thể cho thấy sự biến đổi rất lớn trong hệ gen của con người. Ngay cả những thay đổi nhỏ trong các vùng mã hóa và điều chỉnh của các gen cấu trúc có thể dẫn đến sự chấm dứt sự tổng hợp một protein nhất định hoặc mất chức năng của nó trong cơ thể con người, thường ảnh hưởng đến kiểu hình của bệnh nhân. Tuy nhiên, khoảng 90% bộ gen của con người bao gồm các chuỗi không mã hoá biến đổi nhiều hơn và có nhiều đột biến trung tính hoặc đa hình, và không có biểu hiện kiểu hình. Các vị trí đa hình (loci) như vậy được sử dụng để chẩn đoán các bệnh di truyền như các marker di truyền. Các loci đa hình có mặt trong tất cả các nhiễm sắc thể và liên kết với một vùng cụ thể của gen. Sau khi xác định localization của locus đa hình, có thể xác lập được genome nào có sự đột biến gây ra bệnh ở bệnh nhân.

Để cô lập các vùng đa hình của ADN, các enzyme vi khuẩn được sử dụng - các enzyme hạn chế, sản phẩm trong đó là các vị trí hạn chế. Các đột biến tự phát xuất hiện ở các vị trí đa hình làm cho chúng kháng cự hoặc, ngược lại, nhạy cảm với hoạt động của một enzyme hạn chế cụ thể.

Sự thay đổi đột biến trong các vị trí hạn chế có thể được phát hiện bằng cách thay đổi độ dài của các đoạn DNA bị giới hạn bằng cách tách chúng bằng điện di và lai với các đầu dò DNA cụ thể. Nếu không có sự hạn chế trong một vị trí đa hình, một đoạn lớn sẽ được phát hiện trên các tế bào điện, và nếu có, sẽ có một mảnh nhỏ hơn. Sự có mặt hoặc không có vị trí hạn chế ở các locus giống hệt nhau của nhiễm sắc thể tương đồng làm cho nó có thể xác định được một cách đáng tin cậy gen đột biến và bình thường và theo dõi sự lây truyền của nó đến con cái. Do đó, trong nghiên cứu DNA của bệnh nhân, ở cả hai nhiễm sắc thể, trong đó một vị trí hạn chế có mặt trong vùng đa hình, các mảnh DNA ngắn sẽ được tiết lộ trên điện di. Ở những bệnh nhân đồng hợp tử cho một đột biến làm thay đổi vị trí hạn chế đa hình, sẽ phát hiện các mảnh dài hơn, và trong các mảnh dị hợp tử, các đoạn ngắn và dài sẽ được xác định.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]